AOS增强植株对致病疫霉的抗性用100μg/mLAOS分别喷施拟南芥和本氏烟,广东褐藻寡糖凝胶妇,24h后,接种致病疫霉。结果显示与喷施ddH2O的植株相比,AOS处理的叶片接种部位的水渍及叶片的黄化程度明显降低,检测致病疫霉菌丝的生长量也明显低于对照,表明AOS也可以增强植株对致病疫霉的抗性。AOS诱导植物早期免疫应答反应对喷施AOS和ddH2O的本氏烟叶片进行相关免疫反应的检测。结果显示,在气孔开度方面,与ddH2O处理的对照组相比,AOS处理的本氏烟叶片的气孔开度明显较低,表明AOS通过调节叶片表面气孔的开合抑制病原菌的入侵。分别于2h、4h、8h、24h和48h时,对喷施AOS和ddH2O的本氏烟叶片进行DAB和NBT组织化学染色,发现喷施ddH2O的叶片染色程度较浅,而喷施AOS的叶片染色程度较深,且在24h时染色深。qRT-PCR检测ROS合成基因RbohA,广东褐藻寡糖凝胶妇、RbohB以及去除基因SOD、APX和CAT表达水平,显示RbohB基因表达量明显上调,CAT基因表达量明显下降,广东褐藻寡糖凝胶妇,说明AOS可以通过抑制CAT基因和促进RbohB基因的表达,提高过氧化氢的积累。褐藻寡糖可以通过SA信号途径促进NPR1和PR1蛋白基因的表达,使植株获得系统性抗性,增强对病毒的抵抗能力。广东褐藻寡糖凝胶妇
从植物生长与抵抗逆境的特性出发,利用外源性寡糖对其进行作用,通过检测植物生长指标和抗逆指标变化,来研究寡糖在植物促生长与诱导抗逆过程中的作用机制。一方面对褐藻寡糖在植物促生长与抗逆领域的作用机理进行表征,另一方面,也希望能够通过此研究获得具有优良生物功能活性的寡糖制剂,为农业生产抗灾减灾做出贡献。选择三种来源(褐藻胶、果胶、壳聚糖)的不同分子量大小的九种寡糖片段进行研究。利用植物的促生长和抗逆指标进行筛选,获得了一种既具有明显的促生长作用,又具有抗逆作用的寡糖片段,为褐藻寡糖HZ3,经过质谱分析,其组分是以二、三糖为主的含有少量四糖和五糖的寡糖混合物。第二部分是利用植物的植株、愈伤组织和悬浮细胞为材料,建立起寡糖促生长的综合性的验证方法。对植株分别选择了双子叶植物豌豆和单子叶植物玉米,利用寡糖浸种,分别考察在种子萌发与幼苗生长初期其体内蛋白酶、淀粉酶和激S含量的变化,结合种子与植株的生长指标,探讨寡糖的促生长作用机理。广东褐藻寡糖凝胶妇褐藻胶寡糖对植物来说也是一种重要的信号分子,能够参与植物的生长调节和诱导抗病过程。
褐藻寡糖对POD及其同工酶的影响POD是植物体内重要抗逆酶类之一,能够催化乙烯生物合成,参与氧自由基消除反应,其活力高低通常是表征植物抗逆性能关键指标之一。喷施ADO后进行低温胁迫,浓度为0.05%,0.20%,0.30%ADO组能够显著提高POD活力,同工酶谱带宽度增加,颜色加深,表明POD含量受到ADO诱导而增加;并且0.20%和0.30%浓度组还能够诱导产生POD同工酶新谱带,以0.20%浓度ADO诱导效果好;0.10%浓度ADO组24h内POD变化幅度较小且处于较低水。48h后迅速升高,表明叶片内氧自由基含量升高,细胞开始受到损伤;高浓度1.00%ADO组随低温胁迫时间延长细胞损伤加剧,POD活力不断降低。
褐藻寡糖对CAT活性的影响植物遭受低温伤害时,过氧化氢酶系统首先受到破坏损伤,造成体内过氧化氢去除链条断裂、积累增加,由于过氧化氢积累可以严重损害植物细胞膜和其它代谢酶类,因此CAT活力能够反映植物去除过氧化氢能力强弱和植物遭受损程度大小。图6为烟C叶片CAT活力变化。由图可知,水处理组在低温胁迫后,短时间内CAT活力迅速下降,随着时间延长,植物体内抗逆反应启动,会增加CAT生成以去除积累的过氧化氢,因此CAT含量又缓慢升高。喷施寡糖后进行低温胁迫,0.05%,0.20%,0.30%ADO组中烟CCAT活力变化规律相似:短时间内均能够诱导烟CCAT活力迅速升高,12h达到高峰,且峰值都高于空白对照,随着时间延长,CAT活力又缓慢下降,以0.20%褐藻寡糖的诱导效果好;0.10%褐藻寡糖处理组在6~24h之内CAT含量与对照相比变化较小,但48h烟C叶片CAT活力迅速下降,说明CAT受到破坏而活力降低。高浓度1.00%褐藻寡糖组经过相同时间低温胁迫,其CAT活力均低于水处理组,说明1.00%褐藻寡糖对烟C产生了毒副作用,加剧了烟C叶片损伤。褐藻寡糖不仅可促进植物的生长,而且可提高植物对病害的抵抗力。
褐藻寡糖对烟C细胞内游离脯氨酸含量的影响研究发现,几乎所有逆境胁迫都能够造成植物体内游离脯氨酸积累。在植物体内,脯氨酸是作为1种渗透保护剂参与植物抗逆过程,缓解植物因低温伤害造成的渗透胁迫,因此检测植物体内游离内脯氨酸含量,可以在一定程度上判断植物遭受逆境胁迫危害程度。图5是烟C叶片游离脯氨酸含量变化。由图可知,水处理组经低温胁迫后,游离脯氨酸含量短时间内剧烈增加,6h时为空白对照的4倍,随着低温处理时间延长,游离脯氨酸积累加剧,48h后是空白对照的11.8倍。喷施寡糖后进行低温胁迫,0.05%~0.30%褐藻寡糖能够明显降低烟草体内游离脯氨酸积累,0.10%褐藻寡糖在24h以内效果比较好,但48h时游离脯氨酸含量明显升高。1.00%褐藻寡糖短时间内使烟C叶片内游离脯氨酸含量剧烈增加,随着时间延长积累不断加剧,表明较高浓度褐藻寡糖溶液会对烟C细胞产生毒副作用,低温下更加剧了细胞损伤破坏。褐藻寡糖使作物幼苗的生物量升高,影响作物的生理指标如丙二醛(MDA)含量降低,相关抗氧化酶活性升高。广东褐藻寡糖凝胶妇
褐藻寡糖作为一种信号分子,还参与调节植物的生长发育能调控生物合成过程从而保护果实品质提高果实的产量。广东褐藻寡糖凝胶妇
褐藻胶(Alginate)是由L-古罗糖醛酸和杂D-甘露糖醛酸聚合而成的一种直链酸性多糖。褐藻胶寡糖是由海藻酸钠经过化学或酶法降解而成,其具有溶解性强、稳定性好、易被机体吸收等优点。国内外的研究初步探索了褐藻寡糖作为激发子诱导植物产生抗性反应、促进作为种子萌发及幼苗生长和增强抵抗病原体侵染的能力。张运红等研究发现褐藻胶寡糖均能显著提高小麦种子的发芽指数和活力指数,明显加快小麦种子的萌发速率。张守栋等研究发现褐藻胶寡糖作为激发子能够显著提高大豆种子发芽率和萌发过程中脂肪酶的活性。马纯艳等研究发现褐藻胶寡糖浸种处理有利于提高高粱种子发芽率和淀粉酶活力。但是将褐藻胶寡糖应用到制麦工业中,作为制麦添加剂对促进大麦发芽和提高麦芽质量研究还鲜有报道。本实验在制麦过程中添加褐藻胶寡糖,研究其对大麦发芽、水解酶活和麦芽质量的影响,以期为制麦工业提供实验和理论依据。 广东褐藻寡糖凝胶妇
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